ATP11B Plasmide Double Nickase (m): sc-429296-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ATP11B Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ATP11B Double Nickase Plasmid (m) e il ATP11B Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Atp11b. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ATP11B Plasmide Double Nickase (m) | sc-429296-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATP11B Plasmide Double Nickase (m2) | sc-429296-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Atp11b codifica ATP11B, una flippasi di fosfolipidi P4-ATPasi che aiuta a mantenere l’asimmetria lipidica di membrana traslocando aminofosfolipidi tra i due foglietti del doppio strato all’interno del sistema endomembranoso. Modellando la gemmazione delle vescicole, la curvatura di membrana e il traffico attraverso la rete trans-Golgi e i compartimenti endosomiali, ATP11B supporta lo smistamento del carico, il riciclo dei recettori e l’omeostasi degli organelli. L’alterazione del trasporto lipidico e delle vie vescicolari governate dalle P4-ATPasi può modificare la polarità cellulare, le risposte allo stress e gli output di segnalazione collegati a infiammazione e disfunzioni di membrana associate alla neurodegenerazione. Nei modelli murini, la perturbazione di Atp11b offre un punto di accesso maneggevole per studiare come il rimodellamento dei fosfolipidi si interfacci con il trasporto intracellulare e la proteostasi.
ATP11B Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Atp11b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Atp11b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Atp11b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Atp11b interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.