Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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ATGL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426224
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ATGL Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico ATGL, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ATGL Antibody (F-7): sc-365278
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ATGL Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-426224 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino *Pnpla2* codifica la lipasi dei trigliceridi del tessuto adiposo (ATGL), un enzima chiave che funge da fattore limitante della velocità e avvia l’idrolisi citosolica dei trigliceridi per generare diacilglicerolo e acidi grassi liberi destinati alla β-ossidazione mitocondriale e alla segnalazione lipidica. L’attività di ATGL coordina la lipolisi con l’omeostasi energetica e si integra con il turnover delle gocce lipidiche, i programmi trascrizionali mediati da PPAR e le vie metaboliche responsivi all’insulina. La perturbazione della lipolisi dipendente da ATGL modifica l’accumulo lipidico cellulare e il flusso di acidi grassi, collegando *Pnpla2* a un metabolismo lipidico deregolato e a risposte allo stress nei tessuti metabolicamente attivi. Queste caratteristiche rendono ATGL un bersaglio ampiamente utilizzato per studi meccanicistici sulla biologia delle gocce lipidiche, sul nutrient sensing e sul rimodellamento metabolico.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ATGL (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pnpla2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pnpla2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pnpla2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ATGL.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pnpla2 per lo studio della segnalazione di ATGL, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Pnpla2 critici per la funzione di ATGL
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pnpla2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal ATGL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ATGL CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pnpla2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal ATGL Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ATGL (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pnpla2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pnpla2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.