Atg9a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-434176

Panoramica

Atg9a codifica ATG9A, una proteina di membrana conservata con molteplici domini transmembrana che traffica tra la rete trans-Golgi, gli endosomi e gli autofagosomi nascenti per supportare la fornitura di membrane durante la macroautofagia. Agisce all’interno del macchinario core dell’autofagia regolando l’espansione del fagoforo e la biogenesi dell’autofagosoma, integrando segnali provenienti da vie di sensing dei nutrienti e da pathway di risposta allo stress che influenzano il turnover lisosomiale. Nei sistemi murini, l’alterazione dell’attività di Atg9a viene utilizzata per studiare il controllo, dipendente dall’autofagia, della qualità di proteine e organelli, inclusi la mitofagia e l’omeostasi del reticolo endoplasmatico. La disregolazione dell’autofagia associata ad ATG9A è stata collegata a neurodegenerazione, biologia delle infezioni e fenotipi infiammatori, rendendola rilevante per studi meccanicistici sullo stress cellulare e sul mantenimento dei tessuti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Atg9a (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Atg9a in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Atg9a insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Atg9a a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Atg9a.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Atg9a per lo studio della segnalazione di Atg9a, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Atg9a critici per la funzione di Atg9a
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Atg9a per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Atg9a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Atg9a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Atg9a. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Atg9a Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Atg9a (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Atg9a per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Atg9a definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.