Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
ATG7 Plasmide Double Nickase (m): sc-428805-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ATG7 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ATG7 Double Nickase Plasmid (m) e il ATG7 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Atg7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ATG7 Antibody (B-9): sc-376212
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ATG7 Plasmide Double Nickase (m) | sc-428805-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Atg7 codifica ATG7, un enzima di tipo E1 che attiva ATG12 e le proteine della famiglia LC3/ATG8 per guidare le reazioni di coniugazione “ubiquitin-like” necessarie alla formazione dell’autofagosoma. ATG7 svolge una funzione centrale nella macroautofagia, coordinando il sequestro del carico e il turnover lisosomiale per mantenere la proteostasi e il controllo di qualità degli organelli, inclusa la mitofagia. Attraverso il suo ruolo nel sensing dei nutrienti e nell’adattamento allo stress cellulare, ATG7 influenza la segnalazione immunitaria, il metabolismo e la neurobiologia, e la sua disregolazione è spesso studiata in contesti quali neurodegenerazione, fenotipi infiammatori e risposte allo stress correlate al cancro. Il flusso autofagico dipendente da Atg7 è quindi un readout ampiamente utilizzato per analizzare le vie che collegano la degradazione intracellulare all’omeostasi tissutale.
ATG7 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Atg7 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Atg7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Atg7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Atg7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.