Atg3 Plasmide Double Nickase (h): sc-403308-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Atg3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Atg3 Double Nickase Plasmid (h) e il Atg3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATG3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Atg3 Antibody (A-3): sc-393660
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Atg3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403308-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Atg3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403308-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATG3 codifica Atg3, un enzima di tipo E2 essenziale per l’autofagia che catalizza la coniugazione delle proteine della famiglia LC3/ATG8 alla fosfatidiletanolammina, consentendo l’espansione e la maturazione della membrana dell’autofagosoma. Attraverso il suo ruolo nella cascata di coniugazione ubiquitina-like ATG12–ATG5–ATG16L1, ATG3 supporta il controllo di qualità citoplasmatico, il turnover degli organelli e l’adattamento allo stress da carenza di nutrienti. L’alterazione del flusso autofagico dipendente da ATG3 può influenzare la proteostasi, l’omeostasi mitocondriale e la segnalazione dell’immunità innata, processi spesso implicati nella neurodegenerazione, nella biologia delle infezioni e nelle risposte allo stress delle cellule tumorali. Di conseguenza, ATG3 rappresenta un nodo utile per studiare l’autofagia selettiva, la degradazione dipendente dal lisosoma e i programmi di sopravvivenza cellulare in condizioni di stress metabolico o proteotossico.
Atg3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATG3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATG3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATG3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATG3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.