Atg2B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-429358

Panoramica

Atg2b codifica la proteina correlata all’autofagia Atg2B, un fattore conservato necessario per la biogenesi e la maturazione degli autofagosomi. Atg2B svolge un ruolo nella gestione dei lipidi nei siti di contatto tra membrane, sostenendo l’espansione del fagoforo e un flusso autofagico efficiente, processi che integrano il rilevamento dei nutrienti e il controllo di qualità degli organelli. L’alterazione delle vie autofagiche che coinvolgono Atg2B può compromettere la proteostasi, l’omeostasi mitocondriale e la segnalazione dell’immunità innata, collegando questo gene a meccanismi rilevanti per la neurodegenerazione, la biologia del cancro e fenotipi infiammatori in modelli sperimentali. Nei sistemi murini, Atg2b è quindi ampiamente studiato per il suo ruolo nell’adattamento allo stress cellulare e nel turnover di macromolecole danneggiate.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Atg2B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Atg2b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Atg2b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Atg2b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Atg2B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Atg2b per lo studio della segnalazione di Atg2B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Atg2b critici per la funzione di Atg2B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Atg2b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Atg2B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Atg2B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Atg2b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Atg2B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Atg2B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Atg2b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Atg2b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.