ATF4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-400155-KO-2

Panoramica

Il fattore di trascrizione attivante 4 (ATF4) è un fattore di trascrizione bZIP centrale nella risposta integrata allo stress, in cui viene tradotto preferenzialmente in seguito alla fosforilazione di eIF2α e coordina programmi trascrizionali adattativi. ATF4 regola il metabolismo degli amminoacidi, l’omeostasi redox, l’autofagia e la segnalazione dello stress del reticolo endoplasmatico (ER), inclusi meccanismi di crosstalk con PERK–EIF2AK3, ATF3 e CHOP/DDIT3 per bilanciare esiti di sopravvivenza e apoptosi. Tramite il controllo del nutrient sensing e della proteostasi, ATF4 influenza la funzione mitocondriale e i programmi di differenziamento cellulare, e contribuisce al rimodellamento trascrizionale in condizioni di ipossia e stress ossidativo. Un’attività deregolata di ATF4 è stata implicata nell’adattamento allo stress delle cellule tumorali, nello stress proteotossico associato alla neurodegenerazione e in fenotipi di malattie metaboliche, rendendolo un nodo chiave per studi meccanicistici delle reti geniche responsabili allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ATF4 (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ATF4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ATF4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ATF4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ATF4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ATF4 per lo studio della segnalazione di ATF4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ATF4 critici per la funzione di ATF4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ATF4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ATF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ATF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ATF4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ATF4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ATF4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ATF4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ATF4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.