ATF3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-416577-ACT

ATF3 (activating transcription factor 3) è un fattore di trascrizione bZIP inducibile dallo stress che integra segnali eterogenei, come stress del reticolo endoplasmatico (ER), danno al DNA, stress ossidativo e segnalazione infiammatoria, in programmi trascrizionali dipendenti dal contesto. Modula reti geniche correlate ad AP-1 e può funzionare come repressore o attivatore trascrizionale a seconda dei partner di legame e dello stato della cromatina, determinando esiti che includono controllo del ciclo cellulare, apoptosi e adattamento metabolico. L’attività di ATF3 interseca le vie MAPK, NF-κB e della risposta alle proteine mal ripiegate (unfolded protein response), collegando le risposte acute allo stress a cambiamenti di più lungo termine nella differenziazione e nella regolazione immunitaria. Un’espressione deregolata di ATF3 è stata associata a fenotipi infiammatori alterati e alla segnalazione di stress associata ai tumori, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici della plasticità dello stato cellulare.

ATF3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ATF3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ATF3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ATF3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ATF3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ATF3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ATF3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ATF3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ATF3 nelle cellule tumorali con espressione di ATF3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.