ATAD5 Plasmide Double Nickase (h): sc-405654-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ATAD5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ATAD5 Double Nickase Plasmid (h) e il ATAD5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATAD5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ATAD5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405654-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ATAD5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405654-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATAD5 (proteina 5 contenente il dominio AAA della famiglia delle ATPasi) è un regolatore chiave della stabilità genomica e agisce nella riparazione post-replicativa facilitando la rimozione di PCNA dalla cromatina, coordinando la progressione della forcella replicativa e il recupero dopo danno al DNA. Opera all’interfaccia tra la replicazione del DNA e le vie di tolleranza al danno al DNA, inclusi il template switching e la sintesi translesione, limitando così la mutagenesi associata alla replicazione. Grazie al suo ruolo nel mantenimento della fedeltà replicativa e nella prevenzione dell’instabilità cromosomica, ATAD5 è collegata a meccanismi rilevanti per la tumorigenesi e per altre condizioni determinate da difetti nella riparazione del DNA e da stress replicativo.
ATAD5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATAD5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATAD5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATAD5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATAD5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.