ASPP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-404330-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ASPP1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ASPP1 Double Nickase Plasmid (h) e il ASPP1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PPP1R13B. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ASPP1 Antibody (LX011): sc-53903
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ASPP1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-404330-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ASPP1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404330-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP1R13B codifica la proteina 1 stimolatrice dell’apoptosi di p53 (ASPP1), un regolatore della trascrizione responsiva allo stress che modula l’attività della famiglia di p53 e influenza le decisioni sul destino cellulare. ASPP1 promuove programmi trascrizionali legati all’apoptosi e al controllo del ciclo cellulare facilitando il reclutamento di p53/p63/p73 su specifici promotori bersaglio, intersecandosi con le vie della risposta al danno al DNA e della segnalazione dei checkpoint. Attraverso queste funzioni, PPP1R13B è stato studiato nel contesto di un’alterata competenza apoptotica, dell’attenuazione delle vie dei soppressori tumorali e di una più ampia disregolazione di reti trascrizionali rilevanti per la trasformazione oncogenica. Il suo ruolo regolatorio lo rende inoltre utile per analizzare come gli output di p53, specifici del contesto, siano plasmati dalla disponibilità di cofattori e dallo stato della cromatina.
ASPP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PPP1R13B nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PPP1R13B. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PPP1R13B. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PPP1R13B interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.