ASPP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423473

Panoramica

Ppp1r13b codifica ASPP1, una proteina che stimola l’apoptosi, si lega al dominio di legame al DNA dei fattori di trascrizione della famiglia di p53 e ne orienta l’attività verso geni bersaglio pro-apoptotici. Attraverso la modulazione della trascrizione dipendente da p53/p63/p73, ASPP1 contribuisce all’apoptosi indotta da stress, al controllo del ciclo cellulare e al mantenimento dell’integrità genomica. La funzione di ASPP1 interseca le vie di segnalazione della risposta al danno del DNA e le reti di co-regolatori trascrizionali che determinano le decisioni sul destino cellulare. Un’alterata regolazione di questo asse è rilevante per la biologia tumorale e per altre condizioni in cui difetti dell’apoptosi e del controllo dei checkpoint contribuiscono a fenotipi cellulari associati alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ASPP1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ppp1r13b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ppp1r13b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ppp1r13b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ASPP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ppp1r13b per lo studio della segnalazione di ASPP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ppp1r13b critici per la funzione di ASPP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ppp1r13b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ASPP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ASPP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ppp1r13b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ASPP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ASPP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ppp1r13b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ppp1r13b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.