Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ASPH Plasmide Double Nickase (m): sc-425778-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ASPH Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ASPH Double Nickase Plasmid (m) e il ASPH Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Asph. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ASPH Antibody (A-10): sc-271391
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ASPH Plasmide Double Nickase (m) | sc-425778-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Asph** codifica l’aspartato β-idrossilasi (ASPH), una diossigenasi dipendente da Fe(II)/2-ossoglutarato che catalizza la β-idrossilazione di specifici residui di Asp/Asn all’interno di domini simili all’EGF di determinate proteine. Attraverso la modifica post-traduzionale di substrati extracellulari e associati alla membrana, ASPH può influenzare le interazioni recettore–ligando, l’adesione cellulare e reti di segnalazione dello sviluppo, inclusi processi correlati a Notch. Un’alterata attività di ASPH è stata associata a cambiamenti nei programmi di migrazione cellulare, differenziamento e rimodellamento tissutale. Queste proprietà rendono **Asph** un bersaglio utile per studiare, in modelli meccanicistici di malattia, la modulazione dipendente da enzimi della segnalazione e dei segnali del microambiente.
ASPH Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Asph nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Asph. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Asph. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Asph interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.