ASIC1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401452

Panoramica

ASIC1 (subunità 1 del canale ionico sensibile agli acidi) codifica un canale cationico della famiglia DEG/ENaC, attivato dai protoni e insensibile al voltaggio, che si apre in risposta all’acidificazione extracellulare consentendo l’ingresso di Na⁺ e modulando l’eccitabilità di membrana. ASIC1 contribuisce alla trasmissione sinaptica, alla plasticità neuronale e alla segnalazione dipendente dal pH, integrandosi con vie Ca²⁺-dipendenti e con programmi genici regolati dall’attività nelle cellule eccitabili. Un’alterata attività di ASIC1 è stata collegata a neuroinfiammazione e a risposte allo stress eccitotossico associate a contesti ischemici e neurodegenerativi, ed è inoltre studiata nell’elaborazione sensoriale legata al dolore. Queste caratteristiche rendono ASIC1 umano un bersaglio utile per analizzare i meccanismi di rilevamento dell’acidità, l’omeostasi ionica e le reti di segnalazione accoppiate agli stimoli.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ASIC1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ASIC1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ASIC1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ASIC1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ASIC1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ASIC1 per lo studio della segnalazione di ASIC1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ASIC1 critici per la funzione di ASIC1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ASIC1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ASIC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ASIC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ASIC1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ASIC1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ASIC1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ASIC1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ASIC1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.