ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400429-NIC

ASGR1 codifica la subunità principale del recettore epatico per le asialoglicoproteine (ASGPR1), una lectina di tipo C espressa prevalentemente sulla superficie degli epatociti, che riconosce le glicoproteine desialilate con galattosio terminale o N-acetilgalattosamina. In seguito al legame con il ligando, ASGPR1 media l'endocitosi dipendente dalla clatrina e il traffico verso compartimenti endo-lisosomiali, favorendo la rimozione delle glicoproteine e la regolazione omeostatica delle proteine circolanti. Questo recettore partecipa ai processi di riconoscimento dei carboidrati e di trasporto vescicolare, che si intersecano con vie metaboliche specifiche del fegato e con le dinamiche di riciclo recettoriale. Alterazioni della funzione o dell'espressione di ASGR1 sono spesso studiate nel contesto della disfunzione epatica e del metabolismo lipidico, rendendolo un bersaglio rilevante per studi meccanicistici in biologia del fegato.

ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ASGR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ASGR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ASGR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ASGR1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.