ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400429-ACT

ASGR1 codifica o receptor 1 de asialoglicoproteínas (ASGPR1), uma lectina do tipo C enriquecida em hepatócitos que forma um complexo receptor funcional na membrana plasmática sinusoidal para reconhecer galactose terminal ou N-acetilgalactosamina em glicoproteínas dessialiladas. Esse receptor medeia endocitose dependente de clatrina e o tráfego para lisossomos, contribuindo para a homeostase de glicoproteínas séricas e para a depuração hepática de glicoproteínas circulantes e de partículas modificadas por glicanos. A atividade de ASGPR1 conecta o reconhecimento de glicanos à reciclagem do receptor e às vias de triagem intracelular, integrando-se à maquinaria endocítica e a processos metabólicos hepáticos. Alterações na expressão ou na função de ASGR1 têm sido associadas a mudanças no manejo de lipoproteínas e a fenótipos cardiometabólicos, tornando-o relevante para estudos de captação específica pelo fígado, turnover de proteínas plasmáticas e interações glicoimunes.

ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ASGR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ASGR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ASGR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ASGR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 em células tumorais com expressão de ASGR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.