ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400429-ACT

ASGR1 codifica per il recettore 1 delle asialoglicoproteine (ASGPR1), una lectina di tipo C arricchita negli epatociti che forma un complesso recettoriale funzionale sulla membrana plasmatica sinusoidale, in grado di riconoscere galattosio terminale o N-acetilgalattosammina su glicoproteine desialilate. Questo recettore media l’endocitosi dipendente dalla clatrina e il traffico verso i lisosomi, contribuendo all’omeostasi delle glicoproteine sieriche e alla clearance epatica di glicoproteine circolanti e particelle modificate da glicani. L’attività di ASGPR1 collega il riconoscimento dei glicani al riciclo del recettore e alle vie di smistamento intracellulare, integrandosi con la macchina endocitica e con i processi metabolici epatici. Alterazioni nell’espressione o nella funzione di ASGR1 sono state associate a cambiamenti nella gestione delle lipoproteine e a fenotipi cardiometabolici, rendendolo rilevante per studi sull’uptake specifico del fegato, sul turnover delle proteine plasmatiche e sulle interazioni glicano-immunitarie.

ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ASGR1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ASGR1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ASGR1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ASGR1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ASGPR1/Asialoglycoprotein Receptor 1/ASGR1 nelle cellule tumorali con espressione di ASGR1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.