ASCL1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402039-NIC

ASCL1 (fattore di trascrizione bHLH 1 della famiglia achaete-scute) è un regolatore proneurale che promuove l’impegno verso la linea neuronale e la differenziazione legandosi a motivi E-box e coordinando programmi trascrizionali che controllano l’uscita dal ciclo cellulare, la crescita dei neuriti e le decisioni di destino neurogenico. Durante lo sviluppo e nei contesti di riprogrammazione cellulare, ASCL1 interagisce con la via di segnalazione Notch e con il rimodellamento della cromatina per bilanciare il mantenimento dei progenitori rispetto alla differenziazione, ed è comunemente utilizzato come marcatore ed effettore di stati trascrizionali di tipo neuroendocrino. Un’espressione deregolata di ASCL1 è stata collegata a un’aberrante plasticità di linea e ad alterazioni dei programmi di differenziazione neuroendocrina, rendendolo rilevante per lo studio dei circuiti trascrizionali nello sviluppo neurale e nella biologia tumorale. Queste proprietà supportano ricerche sulla specificazione del destino cellulare, sulle reti di fattori di trascrizione e sul controllo epigenetico dell’espressione genica neuronale.

ASCL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ASCL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ASCL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ASCL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ASCL1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.