ASC/TMS1/PYCARD Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400151-LAC

PYCARD codifica ASC (nota anche come TMS1), una proteina adattatrice che durante l’assemblaggio dell’inflammasoma collega i recettori di riconoscimento dei pattern alla caspasi-1. Attraverso i domini PYD e CARD, ASC nuclea “speck” di ASC multimerici per promuovere l’attivazione della caspasi-1 e la successiva maturazione di IL-1β e IL-18, collegando il riconoscimento dell’immunità innata alla morte cellulare piroptotica. La segnalazione dipendente da PYCARD si integra con NLRP3, AIM2 e altre vie dell’inflammasoma, modulando le risposte infiammatorie a infezioni e stress cellulare. Un’attività di ASC deregolata è stata implicata in condizioni infiammatorie croniche e autoimmuni, nella neuroinfiammazione e nell’infiammazione associata ai tumori, rendendola un bersaglio chiave per studi meccanicistici sull’immunità innata e sulla morte cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale ASC/TMS1/PYCARD (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PYCARD in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ASC/TMS1/PYCARD (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PYCARD, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ASC/TMS1/PYCARD. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PYCARD e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.