Plásmido CRISPR de Activación (h) ASAHL: sc-407543-ACT

El gen humano **NAAA** codifica la **amidasa ácida de N-aciletanolaminas (ASAHL)**, una enzima lisosomal que hidroliza etanolamidas de ácidos grasos, como la palmitoiletanolamida, en sus ácidos grasos correspondientes y etanolamina. Al controlar los reservorios intracelulares de N-aciletanolaminas bioactivas, ASAHL influye en redes de señalización lipídica que se entrecruzan con la regulación de la inflamación, las respuestas al estrés celular y la función de las células inmunitarias. La actividad de NAAA/ASAHL se estudia habitualmente en el contexto de la neuroinflamación, la biología del dolor y la inflamación metabólica, donde las alteraciones en el recambio de mediadores lipídicos pueden desplazar el “tono” de las vías sin modificar la biosíntesis aguas arriba. Su función asociada al lisosoma también la hace relevante para investigar la homeostasis de los orgánulos y el catabolismo lipídico en modelos celulares pertinentes para enfermedades.

ASAHL El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NAAA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ASAHL El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NAAA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NAAA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ASAHL. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NAAA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ASAHL en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ASAHL en células tumorales con expresión de NAAA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.