ARV1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-407460-ACT

ARV1 (ARV1-Homolog) kodiert ein evolutionär konserviertes, mehrfach transmembranöses Membranprotein, das überwiegend im endoplasmatischen Retikulum lokalisiert ist und an der Lipidhomöostase beteiligt ist. Das humane ARV1 wird mit dem Transport von Sterolen und Sphingolipiden, der Aufrechterhaltung der Membranzusammensetzung sowie der Koordination ER-abhängiger Prozesse in Verbindung gebracht, die die Funktion des sekretorischen Weges und zelluläre Stressantworten beeinflussen. Über seine Rolle bei der Organisation des Lipidgleichgewichts und der Membrandynamik kann ARV1 Signalnetzwerke beeinflussen, die mit Organellintegrität und Proteostase gekoppelt sind. Störungen der ARV1-Expression wurden in genetischen Studien mit neuroentwicklungsbedingten und epileptischen Phänotypen assoziiert, was seine Relevanz für die Erforschung von Krankheitsmechanismen in metabolischen und neurologischen Kontexten unterstreicht.

ARV1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ARV1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ARV1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ARV1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ARV1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ARV1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ARV1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ARV1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ARV1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ARV1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.