ART1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403742-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ART1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il ART1 Double Nickase Plasmid (h) e il ART1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ART1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ART1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403742-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ART1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403742-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ART1 (ecto-ADP-ribosiltransferasi 1) è un enzima ancorato alla superficie cellulare tramite glicosilfosfatidilinositolo (GPI) che catalizza la mono-ADP-ribosilazione di proteine bersaglio utilizzando NAD+ extracellulare. Questa modificazione post-traduzionale può influenzare la segnalazione recettoriale, le interazioni cellula–cellula e la dinamica dell’adesione, ed è stata collegata alla modulazione delle risposte immunitarie e infiammatorie. L’attività di ART1 è associata alla regolazione della segnalazione purinergica e di vie dipendenti dal NAD+ extracellulare che modellano la comunicazione cellulare all’interno dei microambienti tissutali. Un’alterata espressione o attività di ART1 è stata riportata in contesti rilevanti per la biologia del cancro, l’infiammazione delle vie aeree e la funzione delle cellule vascolari, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico per lo studio dell’ADP-ribosilazione extracellulare nelle cellule umane.
ART1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ART1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ART1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ART1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ART1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.