ARRDC4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-406413-LAC

ARRDC4 (arrestin domain containing 4) codifica una proteina adattatrice della famiglia delle α-arrestine, implicata nella regolazione del traffico delle proteine di membrana e nell’attenuazione del segnale attraverso interazioni con ligasi dell’ubiquitina e con il macchinario endocitico. Risponde a segnali di stress cellulare e a stati metabolici, collegando il sensing dei nutrienti alla modulazione del turnover dei recettori e delle vie di segnalazione a valle che influenzano l’omeostasi energetica. ARRDC4 è stata studiata in contesti che includono i tessuti insulino-responsivi e la biologia degli adipociti, dove un’espressione alterata può rimodellare la gestione del glucosio e i programmi del metabolismo lipidico. Un’attività o un’espressione deregolata di ARRDC4 è quindi rilevante per studi meccanicistici della disfunzione metabolica e del rewiring delle vie di segnalazione in modelli di malattie cardiometaboliche e infiammatorie.

Le particelle di attivazione lentivirale ARRDC4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ARRDC4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ARRDC4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ARRDC4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ARRDC4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ARRDC4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.