AROS-29 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-412385

Panoramica

TMEM161A codifica AROS-29, una proteina transmembrana multipasso che si localizza alle membrane intracellulari e che si ritiene contribuisca all’organizzazione delle membrane e alla segnalazione omeostatica nelle cellule epiteliali e in altri tipi cellulari somatici. Sebbene i suoi partner molecolari rimangano definiti solo in parte, TMEM161A è stata collegata a processi che coinvolgono l’integrità degli organelli, le risposte allo stress cellulare e la regolazione di vie legate alla crescita che intersecano il traffico di membrana e la proteostasi. Dati di espressione e di associazione genetica hanno messo in relazione TMEM161A con tratti che influenzano la funzione epiteliale e la suscettibilità all’infiammazione, a supporto di ulteriori studi sul suo ruolo nel mantenimento dei tessuti. Analizzare la biologia di AROS-29 può aiutare a chiarire come i regolatori incorporati nelle membrane influenzino la fedeltà della segnalazione e le transizioni di stato cellulare rilevanti per i meccanismi complessi di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AROS-29 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TMEM161A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TMEM161A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TMEM161A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AROS-29.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TMEM161A per lo studio della segnalazione di AROS-29, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TMEM161A critici per la funzione di AROS-29
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TMEM161A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AROS-29 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal AROS-29 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TMEM161A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AROS-29 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR AROS-29 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TMEM161A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TMEM161A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.