Arnt 2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403101

Panoramica

ARNT2 (aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator 2) codifica un fattore di trascrizione bHLH-PAS che forma eterodimeri con partner quali membri della famiglia HIF per regolare programmi di espressione genica responsivi agli stimoli. Arnt2 contribuisce alle reti trascrizionali legate al rilevamento dell’ossigeno e allo sviluppo, supportando il legame al DNA negli elementi di risposta all’ipossia e coordinando un controllo dei loci bersaglio dipendente dalla cromatina. È di grande rilevanza negli studi sulla differenziazione neuronale e sull’adattamento cellulare allo stress metabolico o ambientale, in cui la trascrizione dipendente da ARNT2 può influenzare la sopravvivenza e le firme geniche specifiche di linea. La disregolazione delle vie associate ad ARNT2 è stata collegata ad alterazioni degli output di segnalazione ipossica e a fenotipi neuro-sviluppativi, rendendolo un nodo utile per l’analisi meccanicistica dei circuiti trascrizionali con dominio PAS.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Arnt 2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ARNT2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ARNT2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ARNT2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Arnt 2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ARNT2 per lo studio della segnalazione di Arnt 2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ARNT2 critici per la funzione di Arnt 2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ARNT2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Arnt 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Arnt 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ARNT2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Arnt 2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Arnt 2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ARNT2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ARNT2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.