Arkadia Plasmide Double Nickase (h): sc-403319-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Arkadia Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Arkadia Double Nickase Plasmid (h) e il Arkadia Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira RNF111. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Arkadia Antibody (1-KK14): sc-134270
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Arkadia Plasmide Double Nickase (h) | sc-403319-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Arkadia Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403319-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF111 codifica Arkadia, una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING che regola la proteostasi e la trascrizione dipendente dal segnale indirizzando specifici substrati verso la degradazione mediata da ubiquitina. Arkadia è un modulatore chiave della segnalazione TGF-β/SMAD, poiché aumenta l’output della via attraverso l’ubiquitinazione di regolatori negativi e influenza processi quali la transizione epitelio-mesenchimale, la determinazione del destino cellulare e l’omeostasi tissutale. Grazie al controllo dei programmi trascrizionali e della stabilità proteica, RNF111 è stato studiato in contesti che includono la biologia dei tumori, la regolazione dello sviluppo e la segnalazione correlata al sistema immunitario. La disregolazione dell’ubiquitinazione dipendente da Arkadia può alterare l’attività di SMAD e l’espressione genica a valle, rendendo RNF111 un nodo utile per studiare il rimodellamento delle vie di segnalazione in modelli cellulari rilevanti per la malattia.
Arkadia Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RNF111 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RNF111. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RNF111. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RNF111 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.