ARK-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423193

Panoramica

Aurkc codifica la chinasi Aurora C (ARK-3), una chinasi serina/treonina che regola la dinamica dei cromosomi e la divisione cellulare attraverso la fosforilazione di substrati mitotici coinvolti nella funzione del centrosoma, nell’assemblaggio del fuso e nella citocinesi. Nelle cellule germinali del topo, l’attività di AURKC è particolarmente importante per la progressione meiotica e per una corretta segregazione cromosomica, intersecandosi con le principali reti regolatorie mitotiche che coordinano gli attacchi cinetocoro–microtubulo e il checkpoint del fuso. La disregolazione della segnalazione delle chinasi Aurora è associata ad aneuploidia e instabilità genomica, processi frequentemente studiati in biologia riproduttiva, genetica dello sviluppo e modelli del ciclo cellulare rilevanti per il cancro. La perturbazione di Aurkc rappresenta quindi un utile punto di accesso per analizzare i meccanismi di mis-segregazione cromosomica e del controllo del ciclo cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ARK-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aurkc in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aurkc insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aurkc a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ARK-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aurkc per lo studio della segnalazione di ARK-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aurkc critici per la funzione di ARK-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aurkc per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ARK-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ARK-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aurkc. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ARK-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ARK-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aurkc per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aurkc definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.