ARID3B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411492-ACT

ARID3B（AT-rich interaction domain 3B）は、ARIDファミリーに属するDNA結合性転写因子をコードし、発生および系譜決定の過程で、クロマチン依存的な遺伝子発現プログラムを制御します。ATリッチな調節配列に結合し、他の転写制御因子と協調することで、ARID3Bは細胞運命決定、増殖制御、分化に関連する転写ネットワークなどのプロセスに影響を与えます。ARID3Bの発現変化は、複数のがんやその他の増殖性疾患で報告されており、転写制御の破綻が増殖・生存・細胞アイデンティティに関わる経路へ影響し得ます。これらの特徴により、ARID3Bはヒト細胞における転写回路、エピジェネティック制御、ならびに遺伝子制御ネットワークの再配線を研究するうえで有用なノードとなります。

ARID3B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ARID3Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ARID3B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ARID3B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はARID3B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ARID3Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のARID3B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるARID3B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびARID3B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるARID3B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。