ARID1B Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402365-ACT

ARID1B codifica la proteina 1B contenente il dominio di interazione AT-rich (AT-rich interaction domain-containing protein 1B), una subunità essenziale del complesso di rimodellamento della cromatina SWI/SNF (BAF) ATP-dipendente, che regola il posizionamento dei nucleosomi e i programmi trascrizionali durante lo sviluppo e la differenziazione. Coordinando l’accessibilità degli enhancer e il rimodellamento dei promotori, ARID1B influenza la specificazione di linea, il controllo del ciclo cellulare e l’espressione genica in risposta al danno al DNA in diversi contesti di segnalazione. Alterazioni della funzione di ARID1B sono state implicate in disturbi del neurosviluppo e in vari tipi di cancro, in cui la deregolazione della cromatina contribuisce a stati trascrizionali aberranti e a un’alterata identità cellulare. Queste caratteristiche rendono ARID1B un bersaglio ampiamente studiato nella regolazione epigenetica, nel controllo trascrizionale e nella mappatura dal genotipo al fenotipo.

ARID1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ARID1B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ARID1B Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ARID1B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ARID1B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ARID1B. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ARID1B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ARID1B nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ARID1B nelle cellule tumorali con espressione di ARID1B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.