ARID1A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400469-ACT

ARID1A codifica una subunità centrale del complesso di rimodellamento della cromatina SWI/SNF (BAF) ATP-dipendente, che regola il posizionamento dei nucleosomi per controllare programmi trascrizionali, specificazione di linea e checkpoint del ciclo cellulare. Attraverso il controllo dell’accessibilità della cromatina, ARID1A influenza le risposte al danno del DNA e le vie che mantengono la stabilità del genoma, inclusa la coordinazione con la segnalazione associata a p53 e allo stress replicativo. La disregolazione o la perdita dell’attività di ARID1A è spesso collegata a riprogrammazione epigenetica e a un uso alterato degli enhancer, con possibili effetti su differenziamento e capacità proliferativa. ARID1A risulta ricorrentemente alterato in molteplici tipi di tumore ed è ampiamente studiato per il suo ruolo nelle transizioni dello stato della cromatina, nell’occupazione dei fattori di trascrizione e nelle vulnerabilità dipendenti dal contesto.

ARID1A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ARID1A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ARID1A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ARID1A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ARID1A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ARID1A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ARID1A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ARID1A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ARID1A nelle cellule tumorali con espressione di ARID1A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.