Plásmido CRISPR de Activación (h) ARHGAP21: sc-403424-ACT

ARHGAP21 codifica una proteína activadora de la actividad GTPasa (GAP) de la familia Rho, que acelera la hidrólisis de GTP en las GTPasas de la familia Rho, ayudando a coordinar la remodelación del citoesqueleto de actina, la polaridad celular y el tráfico de membranas. Mediante la modulación de la señalización de RhoA/Cdc42/Rac, ARHGAP21 influye en procesos como la migración celular, la dinámica de adhesión y el transporte asociado al aparato de Golgi, conectando la organización del citoesqueleto con las vías de tráfico intracelular. La alteración de la señalización de las GTPasas Rho se ha implicado ampliamente en la invasión de células cancerosas, el comportamiento metastásico y fenotipos vasculares e inflamatorios, lo que convierte a ARHGAP21 en un nodo útil para estudiar la reconfiguración de vías en contextos relevantes para la enfermedad. Los investigadores suelen analizar la función de ARHGAP21 en modelos de desregulación del citoesqueleto, programas de transición epitelio-mesénquima y crosstalk de señalización que afecta a la proliferación y la motilidad.

ARHGAP21 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ARHGAP21 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ARHGAP21 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ARHGAP21 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ARHGAP21, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ARHGAP21. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ARHGAP21 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ARHGAP21 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ARHGAP21 en células tumorales con expresión de ARHGAP21 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.