ARH Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406114

Panoramica

LDLRAP1 codifica la proteina adattatrice ARH, un componente chiave dell’endocitosi mediata da clatrina che collega il recettore delle LDL (LDLR) al complesso AP-2 e al rivestimento di clatrina per l’internalizzazione a livello della membrana plasmatica. ARH riconosce i motivi NPXY presenti in LDLR e coordina la selezione del carico, la formazione delle vescicole e il traffico del recettore attraverso i compartimenti endosomiali. Questa via è centrale per l’assorbimento cellulare del colesterolo e l’omeostasi delle lipoproteine, collegando la funzione di LDLRAP1 alla regolazione delle reti del metabolismo lipidico. Le varianti con perdita di funzione in LDLRAP1 sono associate all’ipercolesterolemia autosomica recessiva, rendendo ARH un nodo utile per analizzare i difetti di internalizzazione di LDLR e le conseguenze sulla segnalazione a valle.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ARH (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LDLRAP1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LDLRAP1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LDLRAP1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ARH.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LDLRAP1 per lo studio della segnalazione di ARH, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LDLRAP1 critici per la funzione di ARH
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LDLRAP1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ARH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ARH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LDLRAP1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ARH Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ARH (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LDLRAP1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LDLRAP1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.