ArgRS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-430545

Visão geral

Rars, em camundongos, codifica a arginil-tRNA sintetase (ArgRS), uma aminoacil-tRNA sintetase citosólica central que liga arginina ao seu tRNA cognato para sustentar uma tradução precisa e a homeostase do proteoma. Ao controlar a oferta de tRNA^Arg carregado, a ArgRS influencia a fidelidade da tradução, respostas ao estresse ligadas à disponibilidade de aminoácidos e efeitos a jusante sobre programas de crescimento e diferenciação celular. Alterações na função de aminoacil-tRNA sintetases têm sido associadas a fenótipos do neurodesenvolvimento e neuromusculares, desregulação imune e defeitos proliferativos, tornando Rars um ponto relevante para investigar como perturbações ligadas à tradução remodelam estados celulares. Em modelos murinos, a desregulação de Rars oferece uma via direta para investigar a função de genes essenciais, redes compensatórias de tRNA sintetases e a sensibilidade dependente do contexto ao estresse de proteostase.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ArgRS (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Rars em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Rars, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Rars na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ArgRS.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Rars para a investigação da sinalização de ArgRS, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Rars críticos para a função ArgRS
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Rars para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ArgRS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo ArgRS Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Rars. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ArgRS Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR ArgRS (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Rars para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Rars definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.