ARF6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419191

Descripción general

Arf6 codifica el factor 6 de ADP-ribosilación (ARF6), una pequeña GTPasa que regula el tráfico de la membrana plasmática, la endocitosis y la remodelación del citoesqueleto de actina. ARF6 funciona alternando entre los estados unidos a GDP y a GTP para coordinar el reciclaje de vesículas, el recambio de integrinas y la formación de ondulaciones de membrana, conectando señales de entrada con programas de forma celular y motilidad. Interactúa con el metabolismo de los fosfoinosítidos y con redes de GTPasas de la familia Rho para controlar la dinámica de adhesión y la organización de la actina cortical. La señalización desregulada de ARF6 se ha asociado con fenotipos alterados de migración e invasión, así como con perturbaciones del tráfico de membrana en neuronas y células inmunitarias, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos del comportamiento celular asociado a enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ARF6 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Arf6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Arf6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Arf6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ARF6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Arf6 para la investigación de la señalización de ARF6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Arf6 críticos para la función de ARF6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Arf6 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ARF6 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ARF6 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Arf6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ARF6 (m) y el plásmido HDR ARF6 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Arf6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Arf6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.