ARF4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419189

Panoramica

Arf4 codifica per il fattore di ADP-ribosilazione 4 (ARF4), una piccola GTPasi della famiglia ARF che regola il traffico di membrane e il rimodellamento lipidico a livello dell’apparato di Golgi e del sistema endosomiale. ARF4 alterna ciclicamente stati legati a GDP e a GTP per coordinare la gemmazione delle vescicole, lo smistamento del carico e il trasporto dei recettori, incluse le vie che controllano il traffico secretorio e il targeting verso le ciglia. Attraverso interazioni con il macchinario di rivestimento/adattatore e con il metabolismo dei fosfoinositidi, ARF4 contribuisce a mantenere l’organizzazione degli organelli e la consegna polarizzata delle membrane. Un traffico dipendente da ARF4 deregolato è stato associato ad alterazioni della segnalazione dei recettori, difetti della ciliogenesi e risposte allo stress cellulare rilevanti per la neurobiologia, l’omeostasi epiteliale e fenotipi associati ai tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ARF4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Arf4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Arf4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Arf4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ARF4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Arf4 per lo studio della segnalazione di ARF4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Arf4 critici per la funzione di ARF4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Arf4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ARF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ARF4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Arf4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ARF4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ARF4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Arf4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Arf4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.