Aquaporin 9/AQP9 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401298

Panoramica

AQP9 codifica per l’acquaporina 9, un canale di membrana plasmatica della famiglia delle acquagliceroporine che facilita il trasporto bidirezionale di acqua e di piccoli soluti come glicerolo, urea e altri metaboliti neutri. Regolando il flusso di glicerolo, AQP9 influenza l’equilibrio energetico cellulare e il metabolismo lipidico, sostenendo processi quali la gluconeogenesi e l’omeostasi osmotica nei tessuti metabolicamente attivi. In contesti immunitari ed epiteliali, un’attività alterata di AQP9 è stata associata a cambiamenti nella funzione delle cellule infiammatorie e nella fisiologia di barriera, collegando la sua espressione a vie che integrano il trasporto di membrana con risposte metaboliche e allo stress. Un’espressione deregolata di AQP9 è stata riportata in molteplici condizioni rilevanti per la malattia, inclusi disturbi metabolici e fenotipi associati al cancro, in cui il trasporto di soluti può modulare programmi di proliferazione e sopravvivenza.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 9/AQP9 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AQP9 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AQP9 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AQP9 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aquaporin 9/AQP9.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AQP9 per lo studio della segnalazione di Aquaporin 9/AQP9, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AQP9 critici per la funzione di Aquaporin 9/AQP9
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AQP9 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aquaporin 9/AQP9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Aquaporin 9/AQP9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AQP9. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aquaporin 9/AQP9 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Aquaporin 9/AQP9 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AQP9 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AQP9 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.