Aquaporin 7/AQP7 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402564-ACT

AQP7 codifica l’acquaporina 7, un canale di membrana della famiglia delle acquagliceroporine che facilita il trasporto bidirezionale di acqua e piccoli soluti neutri, in particolare il glicerolo, attraverso la membrana plasmatica. Negli adipociti e nei tessuti metabolicamente attivi, l’efflusso di glicerolo mediato da AQP7 contribuisce al turnover dei trigliceridi e collega la lipolisi all’utilizzo sistemico del glicerolo, influenzando l’omeostasi energetica cellulare. La regolazione di AQP7 incide sull’equilibrio osmotico, sulla permeabilità di membrana e sulla disponibilità di substrati metabolici, intersecando il metabolismo lipidico e il flusso di substrati gluconeogenici. Alterazioni dell’espressione o della funzione di AQP7 sono state studiate in contesti di disfunzione del tessuto adiposo, fenotipi metabolici associati a insulino-resistenza e gestione tessuto-specifica del glicerolo, rilevanti per la ricerca cardiometabolica.

Aquaporin 7/AQP7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di AQP7 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Aquaporin 7/AQP7 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus AQP7 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione AQP7, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Aquaporin 7/AQP7. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus AQP7 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Aquaporin 7/AQP7 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Aquaporin 7/AQP7 nelle cellule tumorali con espressione di AQP7 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.