Aquaporin 5/AQP5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400567

Panoramica

AQP5 codifica l’acquaporina 5, un canale dell’acqua di membrana che facilita un trasporto rapido e selettivo dell’acqua attraverso la membrana plasmatica nei tessuti epiteliali. Negli epiteli secretori delle vie aeree, delle ghiandole salivari e lacrimali e negli alveoli polmonari, AQP5 supporta l’omeostasi dei fluidi e contribuisce all’idratazione delle mucose e alla fisiologia della barriera regolando il movimento transepiteliale dell’acqua. La sua attività è integrata con le risposte allo stress osmotico, il trasporto ionico epiteliale e l’organizzazione delle giunzioni, che nel loro insieme determinano lo strato liquido di superficie delle vie aeree e la secrezione ghiandolare. Un’espressione o una localizzazione disregolata di AQP5 è stata associata a disfunzione epiteliale in condizioni infiammatorie delle vie aeree, ipofunzione delle ghiandole salivari e alterata gestione dell’acqua nella fisiopatologia polmonare, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla secrezione e sul rimodellamento epiteliale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 5/AQP5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AQP5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AQP5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AQP5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aquaporin 5/AQP5.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AQP5 per lo studio della segnalazione di Aquaporin 5/AQP5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AQP5 critici per la funzione di Aquaporin 5/AQP5
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AQP5 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AQP5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aquaporin 5/AQP5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Aquaporin 5/AQP5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AQP5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AQP5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.