Aquaporin 1/AQP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400340-LAC

L’AQP1 umano codifica l’acquaporina 1, un canale tetramerico di membrana per l’acqua che consente un rapido trasporto osmotico di acqua attraverso le membrane plasmatiche e barriere specializzate. AQP1 contribuisce all’omeostasi dei fluidi e alla permeabilità microvascolare ed è integrata in processi quali il trasporto endoteliale, la regolazione del volume cellulare e l’equilibrio dei fluidi tissutali. Oltre al flusso d’acqua, AQP1 è stata collegata, in alcuni contesti, alla migrazione cellulare e a comportamenti angiogenici, mettendo in relazione l’attività del canale con la dinamica del citoscheletro e le interazioni con il microambiente extracellulare. Un’espressione o una localizzazione disregolata di AQP1 è stata segnalata in disturbi caratterizzati da un’alterata gestione dei fluidi e da una funzione anomala della barriera vascolare, a supporto della sua utilità come bersaglio di ricerca nella biologia dell’edema, nella fisiologia di rene e polmone e negli studi sul microambiente tumorale.

Le particelle di attivazione lentivirale Aquaporin 1/AQP1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di AQP1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Aquaporin 1/AQP1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione AQP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Aquaporin 1/AQP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo AQP1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.