Aquaporin 1/AQP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400340-NIC

AQP1 (aquaporina 1) è un canale di membrana tetramerico che facilita un trasporto rapido e selettivo dell’acqua attraverso la membrana plasmatica e contribuisce al mantenimento dell’equilibrio osmotico e del volume cellulare. Nei tessuti umani è altamente espressa negli eritrociti, nel tubulo prossimale renale e nel tratto sottile discendente dell’ansa di Henle, nel plesso coroideo e nell’endotelio microvascolare, sostenendo processi quali il movimento transepiteliale dei fluidi e la permeabilità microvascolare. Il flusso d’acqua dipendente da AQP1 si intreccia con le risposte allo stress osmotico e a segnali meccanici, modulando la motilità cellulare e l’omeostasi dei fluidi tissutali. Un’alterata espressione di AQP1 è stata associata a una gestione disfunzionale dei fluidi e a fenotipi legati all’edema, ed è spesso studiata in contesti che includono la fisiologia renale, l’angiogenesi e il rimodellamento del microambiente associato ai tumori.

Aquaporin 1/AQP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AQP1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AQP1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AQP1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AQP1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.