Aquaporin 1/AQP1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419172-ACT

Il gene murino *Aqp1* codifica l’Aquaporina 1 (AQP1), un canale per l’acqua tetramerico che consente un rapido movimento osmotico dell’acqua attraverso le membrane plasmatiche e поддержisce l’omeostasi dei fluidi nell’endotelio microvascolare, nei tubuli prossimali renali e in altri epiteli deputati al trasporto di acqua. Regolando il volume cellulare, il flusso d’acqua transcellulare e i gradienti osmotici locali, AQP1 influenza processi quali la permeabilità capillare, la secrezione e il riassorbimento epiteliali e il comportamento migratorio in determinati tipi cellulari. Il trasporto d’acqua dipendente da *Aqp1* si integra con vie che controllano la gestione degli ioni e la funzione di barriera, inclusa la coordinazione con trasportatori di soluti e la dinamica delle tight junctions. Alterazioni dell’espressione o della localizzazione di AQP1 sono state associate a una regolazione anomala dell’equilibrio dei fluidi e a fenotipi legati all’edema, rendendola rilevante per studi di fisiologia renale, permeabilità vascolare e microambienti dei fluidi tissutali.

Aquaporin 1/AQP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Aqp1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Aquaporin 1/AQP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Aqp1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Aqp1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Aquaporin 1/AQP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Aqp1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Aquaporin 1/AQP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Aquaporin 1/AQP1 nelle cellule tumorali con espressione di Aqp1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.