Plásmido CRISPR de Activación (m) Apolipoprotein A I/APOA1: sc-419158-ACT

El gen Apoa1 de ratón codifica la apolipoproteína A-I (APOA1), el principal componente proteico de las lipoproteínas de alta densidad (HDL), que impulsa el eflujo de colesterol y fosfolípidos y favorece el transporte reverso de colesterol. APOA1 actúa junto con transportadores y enzimas de lípidos como ABCA1/ABCG1 y LCAT para promover la biogénesis de HDL nacientes, el remodelado lipídico y la homeostasis lipídica sistémica, conectando la secreción hepática con la eliminación periférica de colesterol. A través de estos procesos, la actividad de Apoa1 se cruza con la biología de las células espumosas de macrófagos, la señalización inflamatoria y las respuestas al estrés oxidativo en tejidos metabólicos. Las alteraciones en la expresión de Apoa1/APOA1 se usan ampliamente como lectura molecular en estudios de dislipidemia, susceptibilidad a la aterosclerosis y regulación de rasgos cardiometabólicos en modelos murinos.

Apolipoprotein A I/APOA1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Apoa1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Apolipoprotein A I/APOA1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Apoa1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Apoa1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Apolipoprotein A I/APOA1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Apoa1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Apolipoprotein A I/APOA1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Apolipoprotein A I/APOA1 en células tumorales con expresión de Apoa1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.