apoC1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403713-ACT

L’APOC1 umano codifica l’apolipoproteina C-I (apoC1), una piccola apolipoproteina scambiabile che si associa alle HDL e alle lipoproteine ricche di trigliceridi per modulare il trasporto e la clearance dei lipidi. apoC1 influenza il rimodellamento delle lipoproteine regolando le interazioni con lipasi e recettori, inclusi effetti sul metabolismo delle VLDL e sull’omeostasi del colesterolo. Attraverso queste funzioni, APOC1 contribuisce a vie che collegano la gestione epatica dei lipidi, la biologia delle cellule schiumose (foam cells) nei macrofagi e la segnalazione infiammatoria nel microambiente vascolare. Un’alterata espressione di APOC1 è stata riportata nella dislipidemia e in fenotipi cardiometabolici, ed è anche oggetto di studio nell’ambito della neuroinfiammazione e delle vie lipidiche correlate alla malattia di Alzheimer.

apoC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di APOC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

apoC1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus APOC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione APOC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di apoC1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus APOC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da apoC1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via apoC1 nelle cellule tumorali con espressione di APOC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.