apoC-II Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419164

Panoramica

Il gene murino Apoc2 codifica l’apolipoproteina C-II (apoC-II), un’apolipoproteina secreta che funge da cofattore essenziale della lipoproteina lipasi, promuovendo l’idrolisi dei trigliceridi nei chilomicroni e nelle VLDL e consentendo l’assorbimento degli acidi grassi liberati da parte dei tessuti periferici. Attraverso questo ruolo, apoC-II è fondamentale per la rimozione dei trigliceridi dal plasma e per il trasporto dei lipidi, collegando l’assorbimento intestinale dei lipidi e la produzione epatica di lipoproteine al metabolismo energetico. Alterazioni della funzione di APOC2 sono associate a fenotipi di grave ipertrigliceridemia e dislipoproteinemia, offrendo un punto di ingresso meccanicistico per studiare l’omeostasi lipidica e le successive risposte allo stress metabolico. I modelli incentrati su Apoc2 sono quindi utili per indagare le vie che connettono lipolisi, flusso di acidi grassi e rimodellamento delle lipoproteine.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO apoC-II (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Apoc2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Apoc2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Apoc2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina apoC-II.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Apoc2 per lo studio della segnalazione di apoC-II, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Apoc2 critici per la funzione di apoC-II
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Apoc2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal apoC-II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal apoC-II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Apoc2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal apoC-II Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR apoC-II (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Apoc2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Apoc2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.