ApoA-V Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402213-ACT

O APOA5 humano codifica a apolipoproteína A-V (ApoA-V), uma apolipoproteína secretada enriquecida no fígado que modula a homeostase dos triglicerídeos plasmáticos ao regular o metabolismo das lipoproteínas de muito baixa densidade (VLDL) e ao aumentar a hidrólise de triglicerídeos dependente da lipoproteína lipase. A ApoA-V participa de vias de transporte e depuração de lipoproteínas, influenciando o processamento de partículas remanescentes e a captação hepática. A variação genética ou a expressão alterada de APOA5 está fortemente associada à hipertrigliceridemia e a fenótipos mais amplos de dislipidemia, conectando esse eixo à biologia do risco cardiometabólico. Por isso, APOA5 é frequentemente estudado no manejo lipídico de hepatócitos, nas respostas ao jejum/alimentação e em redes transcricionais que governam o metabolismo de lipídios.

ApoA-V O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APOA5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ApoA-V O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APOA5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APOA5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ApoA-V. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APOA5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ApoA-V no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ApoA-V em células tumorais com expressão de APOA5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.