APLNR Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402374-LAC

L’APLNR umano codifica il recettore dell’apelina (APJ), un GPCR a sette domini transmembrana che lega i peptidi dell’apelina e ELA/Toddler per regolare programmi di segnalazione cellulare legati alla biologia vascolare. In seguito al legame con il ligando, APLNR si accoppia a Gαi/o e a vie correlate per modulare la segnalazione dei secondi messaggeri, il flusso di calcio e cascate chinasi che includono MAPK/ERK e PI3K/AKT, influenzando la funzione endoteliale, le risposte angiogeniche e l’omeostasi cardiometabolica. L’attività di APLNR viene studiata nello sviluppo e nel rimodellamento cardiovascolare, nella segnalazione associata all’ipossia e nel crosstalk infiammatorio nel microambiente vascolare. Una segnalazione di APLNR deregolata è stata associata a fenotipi rilevanti per la malattia nello scompenso cardiaco, nell’ipertensione polmonare, nei disturbi metabolici e nell’angiogenesi associata ai tumori, a supporto di studi meccanicistici in modelli cellulari pertinenti.

Le particelle di attivazione lentivirale APLNR (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di APLNR in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale APLNR (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione APLNR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di APLNR. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo APLNR e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.