Apelin Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401548-LAC

L’APLN umano codifica apelin, un peptide secreto che funge da ligando del recettore APJ (APLNR) e regola il tono vascolare, l’angiogenesi, l’omeostasi dei fluidi e la segnalazione metabolica. L’interazione apelin–APLNR attiva vie accoppiate a proteine G, tra cui PI3K/AKT, ERK/MAPK e AMPK, influenzando la funzione endoteliale, la contrattilità della muscolatura liscia e le risposte cellulari di sopravvivenza. In contesti rilevanti per la malattia, alterazioni della segnalazione dell’apelin sono state associate a rimodellamento cardiovascolare, ipertensione polmonare, risposte all’ischemia e disfunzione metabolica, rendendo APLN un nodo utile per studiare la comunicazione cellula–cellula nei microambienti vascolari e adiposi. L’espressione di apelin risponde anche a ipossia e segnali infiammatori, supportando studi su programmi trascrizionali di adattamento allo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale Apelin (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di APLN in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Apelin (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione APLN, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Apelin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo APLN e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.