Apelin Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424407-ACT

Il gene murino **Apln** codifica per **apelin**, un ligando peptidico secreto del recettore **APJ (APLNR)** che regola l’omeostasi cardiovascolare, la gemmazione angiogenica, l’equilibrio dei fluidi e la segnalazione metabolica. L’interazione apelin–APLNR modula vie dipendenti da GPCR, tra cui **PI3K–AKT**, **MAPK/ERK** e risposte endoteliali dipendenti dall’**ossido nitrico**, influenzando il tono vascolare e la migrazione delle cellule endoteliali. Nel sistema nervoso centrale e nei tessuti periferici, apelin contribuisce alla regolazione neuroendocrina e all’omeostasi energetica tramite una segnalazione paracrina coordinata. Una deregolazione della segnalazione **Apln/apelin** è stata associata al rimodellamento vascolare, alle risposte allo stress cardiaco e a disfunzioni metaboliche, supportandone l’impiego come nodo meccanicistico in modelli di ricerca cardiometabolici e legati all’infiammazione.

Apelin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Apln senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Apelin Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Apln nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Apln, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Apelin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Apln nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Apelin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Apelin nelle cellule tumorali con espressione di Apln silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.