APC7 Plasmide Double Nickase (m): sc-425084-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- APC7 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il APC7 Double Nickase Plasmid (m) e il APC7 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Anapc7. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: APC7 Antibody (A-6): sc-365649
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
APC7 Plasmide Double Nickase (m) | sc-425084-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
APC7 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-425084-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Anapc7 nel topo codifica APC7, una subunità centrale a ripetizioni tetratricopeptidiche (TPR) del complesso promotore dell’anafase/ciclosoma (APC/C), una ligasi E3 dell’ubiquitina che assicura la corretta progressione attraverso la mitosi e la fase G1 indirizzando regolatori chiave del ciclo cellulare verso la degradazione proteasomiale. APC7 supporta l’assemblaggio dell’APC/C e le interazioni con i coattivatori che coordinano il riconoscimento dei substrati durante il checkpoint di assemblaggio del fuso, l’inizio dell’anafase e l’uscita dalla mitosi. L’alterazione della funzione dell’APC/C può compromettere la stabilità del genoma ostacolando la separazione dei cromatidi e l’affidabilità dei checkpoint, collegando le subunità dell’APC/C a fenotipi associati all’aneuploidia nei tessuti proliferativi. Per questo motivo Anapc7 è spesso studiato, nei modelli murini, in vie che regolano la proteolisi mediata da ubiquitina, la segregazione cromosomica e il controllo del ciclo cellulare.
APC7 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Anapc7 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Anapc7. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Anapc7. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Anapc7 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.