AP-2β Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401846-ACT

TFAP2B codifica il fattore di trascrizione umano AP-2β, un regolatore a legame specifico con il DNA che modula programmi di espressione genica coinvolti nel controllo della differenziazione cellulare, della proliferazione e della definizione dei pattern di sviluppo. AP-2β influenza reti trascrizionali che si intersecano con la segnalazione dei fattori di crescita e con vie che specificano la linea cellulare, plasmando risposte dipendenti dal contesto nei tessuti derivati dalla cresta neurale e in altri compartimenti dello sviluppo. Un’alterata attività di TFAP2B è stata associata a disturbi congeniti dello sviluppo e a stati trascrizionali deregolati rilevanti per la biologia del cancro, a sostegno della sua utilità come nodo per studiare circuiti aberranti di regolazione genica. I ricercatori analizzano spesso AP-2β per mappare i geni bersaglio a valle, definire la logica enhancer-promoter e comprendere come il dosaggio del fattore di trascrizione influisca sulle decisioni di destino cellulare.

AP-2β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TFAP2B senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

AP-2β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TFAP2B nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TFAP2B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di AP-2β. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TFAP2B nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da AP-2β nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via AP-2β nelle cellule tumorali con espressione di TFAP2B silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.