ANP32A Particelle di Attivazione Lentivirale (m2): sc-419111-LAC-2

Il gene murino Anp32a codifica ANP32A, una fosfoproteina nucleare acida conservata che funge da chaperone degli istoni e da modulatore dell’organizzazione della cromatina, influenzando la regolazione trascrizionale e la progressione del ciclo cellulare. ANP32A partecipa a processi nucleari, tra cui la maturazione dell’mRNA e la segnalazione associata alla protein fosfatasi 2A (PP2A), ed è stata implicata nel controllo dell’apoptosi e delle risposte allo stress cellulare attraverso interazioni con complessi proteici regolatori. Un’alterata attività di ANP32A è stata collegata a fenotipi rilevanti per la neurodegenerazione, la biologia dei tumori e la segnalazione infiammatoria, rendendola un locus utile per studiare le relazioni genotipo–fenotipo nei modelli murini. L’editing genetico di Anp32a consente indagini meccanicistiche sulla regolazione epigenetica, sulle reti di segnalazione nucleare e su vie biologiche rilevanti per la malattia in cellule primarie e in sistemi in vivo.

Le particelle di attivazione lentivirale ANP32A (m2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Anp32a in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ANP32A (m2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Anp32a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ANP32A. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Anp32a e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.