Annexin III Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403572-ACT

ANXA3 umano codifica l’annessina III, una proteina calcio-dipendente legante fosfolipidi che si associa alle membrane cellulari e contribuisce all’organizzazione di membrana, al traffico vescicolare e alla dinamica del citoscheletro. L’annessina III è stata collegata alla regolazione della segnalazione infiammatoria e delle funzioni delle cellule dell’immunità innata, inclusi processi rilevanti per la biologia dei granuli e il rimodellamento di membrana. Un’alterata espressione di ANXA3 è frequentemente riportata in studi di oncologia e in ricerche focalizzate sull’infiammazione, dove correla con cambiamenti nella proliferazione cellulare, nella migrazione e nelle risposte allo stress. Queste caratteristiche rendono ANXA3 un nodo utile per studiare la segnalazione prossimale alla membrana e le vie regolatorie dipendenti dai lipidi.

Annexin III Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ANXA3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Annexin III Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ANXA3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ANXA3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Annexin III. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ANXA3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Annexin III nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Annexin III nelle cellule tumorali con espressione di ANXA3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.